Методика изготовления цитологических препаратов для проведения микроядерного теста буккального эпителия человека

На основании проанализированных литературных источников методику изготовления препаратов, используемую разными авторами, можно привести к следующему единому образцу:

  • перед приготовлением препаратов испытуемые прополаскивают рот водой;
  • стерильным шпателем, предварительно обработанным спиртом, делается соскоб слизистой оболочки щеки выше линии смыкания зубов;
  • взятый материал наносят на стекло и высушивают на воздухе;
  • окрашивают красителем;
  • проводят анализ от 1000 до 3000 отдельно лежащих, с непрерывными краями, клеток.

Данная методика, за исключением способа окрашивания, сходна у большинства авторов (Калаев, 2012, 2014, 2016)


Видео с подробным описанием изготовления препарата можно посмотреть и скачать перейдя по ссылке

Некоторые исследователи (Cytogenetic biomonitoring of … , 2000; Мейер, 2010; Sellappa, 2009; Micronucleus test in … , 2011; XRCC1399 and hOGG1326 … , 2009) не сразу наносят мазки на стекло, а шпатель несколько раз ополаскивают в буферном растворе, затем клетки осаждают центрифугированием, надосадочную жидкость удаляют, осадок промывают буферным раствором и распределяют на предметные стекла. Затем препараты высушивают, фиксируют и окрашивают.

Morán-Martínez et al. (Genotoxicity in oral… , 2013) наносят предварительно промытую суспензию клеток буккального эпителия на предметные стекла, нагретые до 37 ° C. Затем полученные препараты высушивают на воздухе и фиксируют в 80% метаноле при 0 °С в течение 20 мин и снова дают высохнуть при комнатной температуре, окрашивают препараты раствором Гимзе. Затем 1 мл раствора Гимзе помещают на каждый слайд и оставляют на 20 минут. Затем образцы промывают деионизованной водой, а после этого — три-дистиллированной водой и дают высохнуть при комнатной температуре. Для сохранения препаратов стекла покрывают слоем смолы и сушат в течение 8 дней. Для каждого испытуемого изготовляют по два микропрепарата и анализируют на каждом препарате не менее 500 клеток. Таким образом, проводится анализ порядка 1000 клеток для каждого испытуемого.

Мы считаем, что несмотря на хорошее качество получаемых препаратов, данный метод слишком длителен и трудоемок, седиментация приводит к потере и повреждению части клеток, и могут возникнуть вопросы о сопоставимости полученных данных с большинством результатов по микроядерному тесту в буккальном эпителии человека.

НАЗАД